按照细胞冻存的步骤来看，细胞在4度的温度下只能放置10分钟，如果超过10分钟，会造成细胞污染等不利情况。当然，细胞冻存是将细胞放在低温环境，减少细胞代谢，以便长期储存的一种技术，添加冷冻保护剂可以很好的改善细胞的破坏与死亡情况。

试管冷冻细胞的方法

一般来说，细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。既可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，又起到了细胞保种的作用。而冷冻细胞有以下两种方法：

1、传统方法：

放好胚胎的冷存管置于4℃10分钟、-20 ℃30分钟、-80 ℃ 16～18小时(或隔夜)、液氮槽vaporphase长期储存。-20 ℃不可超过1小时，以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80 ℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

2、程序降温：

利用已设定程序的等速降温机以-1～-3 ℃/分钟之速度由室温降至(-80 ℃以下)-120 ℃，再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。